Solución:
La referencia a la cadena de conexión debe hacerse como tal:
MySQLHelper.ExecuteNonQuery(
ConfigurationManager.ConnectionStrings["MyDB"].ConnectionString,
CommandType.Text,
sqlQuery,
sqlParams);
ConfigurationManager.AppSettings["ConnectionString"] estaría buscando en el AppSettings por algo llamado ConnectionString, que no encontraría. Es por eso que su mensaje de error indicaba "ConnectionString" property has not been initialized, porque busca una propiedad inicializada de AppSettings llamado ConnectionString.
ConfigurationManager.ConnectionStrings["MyDB"].ConnectionString indica que busque la cadena de conexión denominada “MyDB”.
Aquí hay alguien hablando sobre el uso de cadenas de conexión web.config
Obtiene este error cuando una fuente de datos intenta vincularse a datos pero no puede porque no puede encontrar la cadena de conexión. En mi experiencia, esto no suele deberse a un error en web.config (aunque no estoy 100% seguro de esto).
Si está asignando una fuente de datos mediante programación (como SqlDataSource) o creando una consulta (es decir, utilizando una combinación SqlConnection / SqlCommand), asegúrese de asignarle una ConnectionString.
var connection = new SqlConnection(ConfigurationManager.ConnectionStrings[nameOfString].ConnectionString);
Si está conectando un elemento vinculado a datos a una fuente de datos (es decir, un GridView o ComboBox a una SqlDataSource), asegúrese de que la fuente de datos esté asignada a una de sus cadenas de conexión.
Publique su código (para que el elemento de enlace de datos y el web.config sean seguros) y podemos echarle un vistazo.
EDITAR: Creo que el problema es que está intentando obtener la Cadena de conexión del área AppSettings y, mediante programación, no es donde existe. Intenta reemplazar eso con ConfigurationManager.ConnectionStrings["ConnectionString"].ConnectionString (si ConnectionString es el nombre de su cadena de conexión).
La cadena de conexión es no en Ajustes de Aplicacion.
Lo que estás buscando está en:
System.Configuration.ConfigurationManager.ConnectionStrings["MyDB"]...